要想實驗做得好，PCR儀的操作很重要
更新時間：2019-09-05 點擊次數(shù)：2241次
要想實驗做得好，PCR儀的操作很重要
PCR儀是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。目前常用的技術(shù)，可以將一段基因復(fù)制為原來的一百億至一千億倍。利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈，進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。可實現(xiàn)更好的引物退火溫度控制，該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計帶有三個或更多分割金屬模塊，對于樣品溫度控制的能力對于PCR檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和整體性能十分重要。儀器特異性的參數(shù)如升降溫速度，維持時間以及算法對于預(yù)測樣品溫度，包括模塊溫度都是準(zhǔn)確控制樣品溫度的關(guān)鍵。它的升降溫速度意味著在一定時間內(nèi)發(fā)生的PCR步驟之間的溫度變化，并通過用攝氏度每秒(°C/sec)作為單位。 相應(yīng)的“升溫”和“降溫”分別代表著熱模塊的加熱和冷卻過程。
PCR儀的操作注意事項：
盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真，在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意：
1.戴一次性手套，若不小心濺上反應(yīng)液，立即更換手套；
2.使用一次性吸頭，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，PCR儀吸頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；
3.避免反應(yīng)液飛濺，打開反應(yīng)管時為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
4.操作多份樣品時，制備反應(yīng)混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應(yīng)的度；
5.后加入反應(yīng)模板，加入后蓋緊反應(yīng)管；
6.操作時設(shè)立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應(yīng)的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性；
7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染，使用可替換或高壓處理的加樣器。
如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR儀操作過程中加樣器應(yīng)該，不能交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū)；
8.重復(fù)實驗，驗證結(jié)果，慎下結(jié)論。
